Дисертаційна робота присвячена вивченню особливостей впливу кріоконсервування за різними режимами на структурні і функціональні характеристики мононуклеарів (МНК) кісткового мозку та дендритних клітин (ДК) отриманих з них in vitro.Суттєва увага в роботі приділяється оцінці толерогенного потенціалу отриманих з кріоконсервованих МНК ДК, а саме, здатності мінімізувати прояви у мишей ад’ювантного артриту (АА) як експериментальної моделі ревматоїдного артриту (РА) у людини.В роботі було використано наступні сучасні методи досліджень: кріоконсервування, культивування in vitro, проточна цитофлуориметрія, ПЛР в реальному часі, імуномагнітне сортування клітин, інвертована та світлова мікроскопія.Відпрацьовано метод виділення з кісткового мозку мишей СВА/Н 20-тижневого віку МНК у градієнті тразографу, який дозволяє отримати більш ніж 40 % клітин, серед яких 12 % становили CD14+-моноцити – попередники ДК. Визначені умови отримання з МНК кісткового мозку ДК з толерогенними властивостями методом культивування in vitro в присутності ГМ-КСФ (20 нг/мл), IЛ-4 (5 нг/мл) та дексаметозону (0,4 мкг/мл). Це дозволило одержати 96% клітин – кандидатів у ДК з високим рівнем життєздатності (92%).Для підтвердження незрілого толерогенного фенотипу ДК, отриманих в культурі, було підібрано панель маркерів для цитофлуориментричного аналізу. Встановлено, що диференціювання моноцитів у незрілі ДК супроводжується появою характерного для цих клітин маркера – CD11b, втратою CD14-антигена і мінімізацією рівня експресії костимуляторних молекул СD80, СD86.Продемонстровано, що важливою складовою патогенезу АА є дисрегуляція функції імунної системи на тлі розбалансування цитокінового профілю з переважним зростанням вмісту прозапальних цитокінів (ІЛ-6, ФНП-α, ІФН-γ) і дисфункції Т- регуляторної (Трег) ланки імунітету. Такі зміни супроводжувались підвищенням клініко-лабораторних показників: рівня сіалових кіслот, серомукоїдів, та індексу артриту (ІА). Вивчено вплив різних режимів (Р) кріоконсервування під захистом 10% ДМСО з повільною швидкістю охолодження: 1 град /хв до – 80ºС (Р1); до – 40ºС (Р2); до – 25ºС (Р3) з наступним зануренням у кожному випадку у рідкий азот (-196 ºС) на структурні та функціональні властивості МНК кісткового мозку. Показано, що змінюючи умови кріоконсервування можна збільшити толерогенний потенціал отриманих для імунотерапії ДК.Вперше доведено, що кріоконсервування МНК за розробленим режимом (Р2) у порівнянні із загальноприйнятим (Р1) забезпечував максимальні показники їх життєздатності, метаболічної активності, та вмісту CD14+ - попередників ДК, разом з високою експресією білків теплового шоку Нsp70 – індукторів їх толерогенної активності. Оцінка функціонального потенціалу ДК отриманих in vitro з кріоконсервованих МНК за Р2 продемонструвала більш високу їхтолерогенну активность. Підтверджено, що підвищення вмісту Hsp70 в них сприяло збільшенню формування Т-регуляторних клітин (CD4+CD25+ та FOXP3+) і їх функіонального потенціалу за рахунок активації гена foxp3. Це призводило до зниження клінічної маніфестації аутоімунної патології у тварин. Встановлено пролонгований ефект імунотерапії дендритними клітинами, отриманими з кріоконсервованих за Р2 МНК. Аналіз вмісту CD4+CD25+- та FOXP3+-клітин, рівня експресії гена foxp3 і ІА на 7 і 14 добу після застосування різного виду толДК показав, що покращення клінічного статусу тварин з АА більшою мірою корелює з вмістом FOXP3+ Т-регулятрних клітин, ніж рівнем експресії гена foxp3.Продемонстрована здатність толДК отриманих з кріоконсервованих МНК корегувати порушений цитокіновий профіль з переважним стимулюванням продукції протизапальних цитокінів (ІЛ-4, ІЛ-10) і нормалізацією клінічного стану тварин з АА. Зіставлення ступеня інгібіції прозапальних і стимуляції протизапальних цитокінів після різного виду толДК-терапії свідчить про їхню здатність реалізувати різноспрямовану і з різним ступенем активність по відношенню до цих цитокінів.Вперше встановлені переваги ДК з кріоконсервованих попередників, особливо за режимом 2 в прояві імунокорегуючої дії в порівнянні з ДК отриманими з нативних МНК.Отримані в роботі результати можуть бути використані лікарями-клініцистами які опановують і впроваджують методи клітинно-тканинної терапії в практику лікування АІЗ, в тому числі РА. Представлений матеріал демонструє можливістьвикористання ультранизьких температур як «інструмента», що здатний спрямовано керувати толерогенним потенціалом ДК, отриманих з клітин-попередників.^UThe dissertation is devoted to the study of the features of the cryopreservation effect under different regimes on the structural and functional characteristics of bone marrow mononuclear cells (MNC) and dendritic cells (DC) obtained from them in vitro. Considerable attention is paid to the assessment of the tolerogenic potential of DCs obtained from cryopreserved MNCs, namely, the ability to minimize the manifestations of adjuvant arthritis (AA) in mice as an experimental model of rheumatoid arthritis (RA) in humans. The following modern research methods were used in the work: cryopreservation, in vitro cultivation, flow cytofluorimetry, real-time PCR, immunomagnetic cell sorting, inverted and light microscopy. A method of isolating MNCs from the bone marrow of 20-week-old SBA/H mice in a trasograph gradient was developed, which allows obtaining more than 40% of cells, among which 12% were CD14+ monocytes - DC precursors.It was established that the differentiation of monocytes into immature DCs is accompanied by the appearance of a marker characteristic for these cells - CD11b, the loss of the CD14 antigen and the minimization of the level of expression of costimulatory molecules CD80, CD86. It has been demonstrated that an important component of the pathogenesis of AA is the dysregulation of the function of the immune system (IS) against the background of an imbalance of the cytokine profile with a predominant increase in the content of pro-inflammatory cytokines (IL-6, TNF-α, IFN-γ) and dysfunction of the T-regulatory (Treg) link of immunity. Such changes were accompanied by an increase in clinical and laboratory indicators: the level of sialic acids, seromucoids, and the index of arthritis (IA).The influence of different modes (P) of cryopreservation under the protection of 10% DMSO with a slow cooling rate was studied: 1 degree / min to - 80ºС (P1); up to - 40ºС (P2); to -25ºС (P3) followed by immersion in liquid nitrogen (-196ºС) in each case for the structural and functional properties of bone marrow MNC. It is shown that changing the conditions of cryopreservation can increase the tolerogenic potential of DCs obtained for immunotherapy.